[ATUM] Protease

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[ATUM] TEV Protease 제품 소개

TEV protease는 정제된 단백질에서 융합 태그를 제거하는 데 사용되는 Tobacco Etch Virus Nla 시스테인 프로테아제의 엔지니어링된 촉매 도메인입니다. ATUM은 태그와 ORF 사이에 TEV protease 인식 부위(ENLYFQ/G)가 있는 벡터를 제공합니다. 효소는 His-tagged가 부착되고 친화적으로 정제됩니다.

Amount:
친화성 정제된 TEV-His 프로테아제 1mg을 50mM Tris-HCl, pH 8, 150mM NaCl, 40% 글리세롤, 1mM DTT에서 1 mg/ml로 희석합니다.

Activity:
TEV 프로테아제(100mg/ml)는 4°C에서 하룻밤 동안 또는 30°C에서 1시간 동안 50mM Tris-HCl, pH 8, 150mM NaCl 및 1mM DTT가 포함된 완충액에서 100% 활성을 나타냅니다. TEV 프로테아제는 온컬럼과 오프컬럼 모두에서 절단하지만, 용액(오프컬럼)에서 더 효율적으로 절단합니다.

Properties:
His 친화성 배지를 사용하여 쉽게 제거할 수 있도록 6XHis 태그가 포함된 변형된 27kDa TEV 프로테아제 구조.

Applications:
TEV 프로테아제는 용액에서 융합 단백질 분해를 위한 효율적인 도구 또는 스트렙타비딘-아가로스에 고정된 TEV 프로테아제입니다.
 

TEV Protease Cleavage Data

  TEV protease는 TEV 인식 부위에서 절단하여 6XHis 태그를 효율적으로 제거합니다. TEV-His 프로테아제로 절단한 후 KringleYFP를 정제하고 His-KringleYFP 및 TEV-His 프로테아제에서 6XHis 태그를 제거한 모습입니다. N-말단 6XHis 및 TEV 절단 부위 ~28kD 밴드(빨간색 화살표로 표시)가 있는 KringleYFP를 4°C O/N 또는 30°C에서 1시간 동안 100µg/ml TEV 프로테아제로 절단했습니다.

비교를 위해 시판되는 TEV-His-GST 프로테아제를 사용했으며, '효소 없음' 샘플은 음성 대조군으로 실행했습니다. IMAC 컬럼에서 총(로드), 흐름 통과 및 용출 분획과 함께 SDS-PAGE 겔을 실행하고 Coomasie 염색을 실시했습니다. 총 분획은 TEV 프로테아제로 처리된 샘플에서 KringleYFP와 TEV 프로테아제(검은색 및 파란색 화살표로 표시된 밴드)를 보여주고, 흐름 통과 분획은 TEV 프로테아제 처리 샘플에서 ~ 26kD 밴드(파란색 화살표로 표시된)로 보이는 His 태그 절단 KringleYFP만을 보여주며, '효소 없음' 대조군에서는 KringleYFP-His의 절단이 보이지 않습니다.

TEV 프로테아제는 4°C 또는 30°C에서 효율적으로 절단됩니다. 빠른 TEV 프로테아제 분해를 위해 30°C에서 KringleYFP가 안정적이지만, 다른 단백질의 경우 30°C에서 배양하기 전에 단백질의 안정성을 테스트할 것을 권장합니다.
 

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